高效液相色譜儀主要由色譜泵及控制器、進樣器、色譜柱、檢測器和數據處理及控制五大部分組成，分離原理是一個物理過程，流動相攜帶著待分析化合物和其他一些共存物質流過色譜柱，利用不同物質在固定相上的保留時間不同，從而出峰時間不同而達到分離，利用保留時間定性，峰高或者峰面積定量，在將分離后的各個成分依次通過一紫外檢測器時就可檢測出各化合物的濃度來。
二手高效液相色譜儀特點：“三高一廣一快”
1、高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，應對載液加高壓。
2、高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到zui佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
3、高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數量級。
4、應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。
5、分析速度快、載液流速快：較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30 min，有些樣品甚至在5min內即可完成，一般小于1h。此外HPLC還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點。
高效液相色譜儀的分離原理
根據分離原理的不同，高效液相色譜法可分為以下幾種主要類型：液-液分配色譜法（LLC）﹑化學健合相色譜法﹑液-固吸附色譜法﹑離子交換色譜法﹑空間排阻色譜法等。
1、液-液分配色譜法（LLC）是基于樣品組分中溶質在固定相和流動相之間的相對溶解度的不同而使組分在兩相之間分配系數不同，進而分離的過程。
2、化學健合相色譜法是把固定液的有機基團通過化學反應鍵合在擔體的表面上，從而克服固定液流失的現象，以達到分離的目的。
3、液-固吸附色譜法是根據樣品中各組分吸附作用的不同而實現彼此分離的過程。
4、離子交換色譜法是利用離子交換原理與液相色譜技術結合的方法來測定溶液中陽離子和陰離子的。
5、空間排阻色譜法是把具有化學惰性的多孔物質作為固定相，使樣品組分受固定相孔徑大小的影響，將不同體積的分子進行分離的過程。
二手高效液相色譜儀應用領域
高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。
與試樣預處理技術相配合，HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能，能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著固定相的發展，有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離。
HPLC成為解決生化分析問題zui有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域。高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。
二手高效液相色譜在食品分析中的應用
在食品生產加工過程中，往往還會添加防腐劑﹑色素﹑甜味劑﹑保鮮劑等化學物質。它們的含量過高也將引起人類的健康問題。此外，由于我們所處環境的日益惡化，也會使食品沾染有害的微量元素來危害我們的身體健康。因此，高效液相色譜在食品分析中起到重大作用。
1、在食品中調味品的分析
高效液相色譜法也可以被用于食物調味品的分離分析。如J.D.BARANOWSKI報導了利用高效液相色譜法分離生姜辣味成分的方法。又如Bbathnanathic M和BuckleH.A報導了使用高效液相色譜法測定胡椒中胡椒堿含量的方法。
2、食品中有機酸的分離
食品中的有機酸是食品中酸味的主要來源，食品中有機酸的種類含量與構成對食品的味道有很大的影響。因此食品中有機酸的定性與定量分析不僅對食品營養研究意義重大，而且在食品生產過程的質量管理中也必不可少。HPLC應用于有機酸的測定時，要先將食品樣品勻漿提取離心后，樣液經0.3um濾膜抽濾，以（NH4）2HPO4—H3PO4緩沖液（pH=2.7）為流動相，用高效液相色譜法在C18色譜柱上分離，在波長210nm處經紫外檢測器檢測，用峰高或峰面積表示的標準曲線測定有機酸的含量。
3、食品中添加劑的分析
食品添加劑不僅種類繁多，功能各異，而且分類沒有統一標準。因此，對添加劑的測定就提出了更加艱巨的要求。食品添加劑的測定同其他分析一樣，首先要將其從復雜的混合物中分離出來，分離后再針對待測物質的物理﹑化學性質的不同來選擇適當的分析方法。高效液相色譜在食品添加劑中的應用，不僅可以提高食品的質量以及營養價值，而且可以改善食品給我們帶來的感觀性質。食品添加劑可以防止食品變質，提高保藏期限，給我們提供美味的口感。我們可以用高效液相色譜法對甜味劑中糖精鈉的含量進行測定。制備糖精鈉的標準儲備液和糖精鈉的標準使用液，將樣品微熱攪拌，并加入氨水（1+1）調試pH=7，以甲醇-乙酸銨溶液（0.02mol/L）（5+95）作為流動相制備色譜柱，取樣品處理液和標準使用液各10uL，注入高效液相色譜儀進行分離，以標準溶液的保留時間為依據進行測定，以其峰面積求出樣液中被測物質的含量。
4、食品中糖類的分離分析
淀粉是一種多糖，它廣泛存在于植物的根﹑莖﹑葉﹑種子等組織中，是人類食物的重要組成部分，同時也是供給人體熱量的主要來源。淀粉是由葡萄糖單位構成的聚合體，其水解產物為單糖。我們可以用高效液相色譜法對小麥淀粉的水解產物進行分析。
5、食品中維生素的分離分析
維生素是人和動物為維持正常的生理功能而需從食物中獲得的一類微量有機物，在人體的生長代謝和發育過程中發揮著重要的作用。在測定脂溶性維生素時，通常要先用皂化法處理樣品，用水洗去除類脂物，然后用有機溶劑提取脂溶性維生素，濃縮后溶于適當的溶劑后測定。
6、在其他食品分析中的應用
HLPC不僅僅是應用在以上領域，還可以廣泛用于食品藥品殘量的檢測，食品中違禁成分的檢測以及食品中營養成分的分離與分析。彭錦峰建立了用高效液相色譜測定食用香菇中甲醛的方法。王帆等鍵立了用高效液相色譜檢測保健食品中大豆異黃酮的方法。這些方法的研究和實驗，使高效液相色譜在食品中的應用得以發展，為日后高效液相色譜在食品分離與分析中的廣泛應用提供了依據。
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